技术

建立了测定胶囊中石杉碱甲含量的反相高效液相色谱法。SpherisorbC18分析柱，以甲醇—水(50∶50，含0.02%的三乙醇胺)作为流动相，在310nm波长检测。石杉碱甲在0.2～50μg/mL浓度范围线性关系良好。最小检测量为1.2ng，方法重现性好，平均回收率为99.59%(n=6)，RSD=1.6%。本法操作简便、精确。

　　石杉碱甲是我国首先分离得到的一种新生物碱，是一种强效的可逆性AChE抑制剂，能改善老年性记忆功能减退，可显著提高AD患者的记忆、认知和行为功能，无明显不良反应，是治疗阿耳茨海默病的一个有前景的药物。石杉碱甲片剂的含量测定采用提取—紫外分光光度法，操作繁复，结果往往偏低。本文采用高效液相色谱法测定了石杉碱甲的含量，表明方法简便、准确，重现性好，结果令人满意。

　　1、仪器与试药

　　高效液相色谱仪(Shimadzu公司LC—6A);紫外检测器(SPD—6A);甲醇(HPLC级);三乙醇胺(AR级);重蒸馏水;石杉碱甲对照品(纯度为99.6%)及胶囊(宁波立华制药有限公司)。

　　2、高效液相色谱定量方法和结果

　　2.1色谱条件色谱柱：SpherisorbC18，250mm×4.6mm，10μm;流动相：甲醇—水(50∶50)，含0.02%的三乙醇胺;检测波长：310nm;柱温：40℃;流速：1.0mL/min;进样量：20μL。

　　2.2溶液的配制石杉碱甲对照品溶液：精密称取80℃烘至恒重的石杉碱甲对照品10mg，置100mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，精密吸取5mL，置100mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，即得石杉碱甲对照品溶液。取石杉碱甲胶囊20颗，内容物研匀。取约200mg精密称定，置10mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，过滤(0.45μm)，备用，即得供试品溶液。

　　2.3线性范围精密吸取石杉碱甲对照品液，加0.01mol/L盐酸溶液配制成0.2、0.4、1、2、4、8、10、25、50μg/mL的溶液，按上述色谱条件，分别进样20μL，以石杉碱甲对照品浓度(μg/mL)为横坐标，主峰面积为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线：

　　Y=7784.9X-178.0r=0.99998

　　线性范围0.2～50μg/mL。

　　2.4回收率测定按处方量称取空白辅料约200mg，精密加入石杉碱甲对照品约50μg(一式6份)，置10mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液，溶解并稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤，进样20μL。计算回收率和相对标准偏差。结果，石杉碱甲平均回收率为99.59%，RSD=1.6%(n=6)。

　　2.5空白试验仅加入辅料成分，按回收率试验项下操作，结果在对照品的出峰时间不出现色谱峰。辅料对主药测定无干扰。

　　2.6重现性试验按样品的测定方法测定同一批样品，结果含量平均值为标示量的97.15%(n=6)，RSD=1.2%。

　　2.7稳定性试验精密吸取供试品溶液20μL，分别于0、1、2、4d时进样测定其峰面积，计算，RSD=0.8%，说明样品稳定性好。

　　2.8样品的测定取供试品溶液和石杉碱甲对照品溶液，分别精密量取上述2种溶液20μL，注入仪器，记录色谱图，测量对照品(r)和供试品(x)待测成分的峰面积，按外标峰面积法计算含量。测定3批样品，结果为标示量的95.56%～97.15%。

　　3、讨论

　　3.1流动相的选择石杉碱甲为生物碱成分，选择以甲醇—水系列为流动相，经试验甲醇—水各种配比(90∶10、80∶20、50∶50)，在30min内均不出峰，而在甲醇—水(50∶50)中加入少许三乙醇胺，使流动相呈弱碱性，则获得适宜的保留时间。

　　3.2检测波长的确定取石杉碱甲对照品，以流动相为溶媒，制成适宜浓度，于紫外200～400nm扫描，结果在310nm处有最大吸收，故确定检测波长为310nm。

　　3.3小结实验表明，本法测定石杉碱甲胶囊含量，样品稳定，重现性好。并且线性范围广、灵敏度高，可用于该制剂溶出度、含量均匀度测定。本法中辅料对测定无干扰，无需样品预处理，结果准确可靠。